2.1 MEDIOS DE CULTIVO

Formulación químicamente definida, para que crezcan plantas in vitro.

2.1.1 ÁREAS DEL LABORATORIO DE CULTIVO DE TEJIDOS.

Un laboratorio de cultivo de tejidos se puede dividir esquemáticamente en aéreas separadas para las diferentes funciones que se desarrollaran en la práctica, sin embargo, algunas de las funciones pueden desarrollarse en un mismo ambiente. Las aéreas o secciones principales son:

1.-  ÁREA DE PREPARACIÓN: se utiliza principalmente para preparar los medios de cultivo, pero debe proveer también un espacio para almacenar los materiales de vidrio y plástico, y los reactivos químicos. Este ambiente debe contar con mesas de trabajo para la preparación de los medios y colocar las balanzas, el medidor de ph, los platos calientes con agitación, y otros elementos; también debe incluir vitrinas, estanterías y espacio para el equipo de refrigeración  y para la incubadora o la cámara de crecimiento.

2.- ÁREA DE LAVADO Y ESTERILIZACIÓN: puede estar constituida por dos aéreas conectadas entre sí, o por un solo ambiente y puede estar conectada dentro del área general de preparación.

El área de lavado debe incluir por lo menos un lavadero grande con agua caliente y agua fría y una fuente de agua con un alto grado de pureza, preferiblemente agua doblemente destilada; para el efecto se debe usar un destilador de vidrio o material no toxico y un desionizador de agua colocado entre el destilador y el lavadero. Esta área debe disponer de un espacio para almacenar agua destilada en botellas de platico; también debe proveer basureros adecuados para el material vegetal, inorgánico y vidrio que se deseche.

3.- área de siembra, transferencia o cámara de cultivo: se realizara el trabajo de escisión, inoculacion y trasferencia de los esplantes a los medios de cultivo, cuenta con cámaras de flujo laminar y todos los accesorios para la inoculacion. 

4.- area de crecimiento o inocubación: los cultivos de incuban en un cuarto apropiado o en gabinetes o camaras de crecimiento: estas pueden ser más eficientes en cuanto al control ambiental, pero son mas costosas. 

 

5.- área de rusticacion, aclimatación o endurecimiento: es la área de aclimatacion en donde los cultivos  deben de estar en condiciones ambientales favorables para su crecimiento.

MATERIAL VEGETAL 

  Plantas madres seleccionadas (pre-acondicionamiento).

  Explantes (elección, disección, esterilización, etc.). Tejido vivo separado de su órgano propio y transferido a un medio artificial de crecimiento.

CONDICIONES DE CULTIVO

v  Asepsia: Es la ausencia de microorganismos que producen enfermedades.

v  Recipientes: se utilizaran los recipientes adecuados para cultivar y propagar los cultivos de tejidos vegetales.

v  Temperatura: Las temperaturas apropiadas para el cultivo varían desde 24 a 26°C. Algunas especies pueden tener una menor tolerancia o requerimientos específicos.

v  Luz y fotoperíodo: Las intensidades de luz usadas tanto para cultivo de semillas como para cultivo de meristemas o yemas van desde la oscuridad hasta los 300 Lux, generalmente obtenidos con fluorescentes y algunas veces complementados con lámparas incandescentes. 

2.1.2 MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO

AÉREAS	MATERIAL	EQUIPO
Área de preparación	Frascos Erlenmeyer, todo material de cristalería.	Refrigerador, balanzas, potenciómetro, plancha eléctrica.
Área de lavado y esterilización	Destilador de vidrio, gradillas, bandejas de aluminio	Autoclave, estufas para esterilización y secado.
Área de siembra	Instrumentos de disección: chuchillas, agujas de disección, pinzas, tijeras, navajas. También se utilizan mecheros de alcohol y bandejas	Gabinete de flujo laminar, microscopio de disección con luz incidente.
Área de crecimiento	Termómetros de máxima y mínima, gradillas para tubos.	Estanterías con iluminación para los cultivos y Aire acondicionado
Área de rusticación	Malla, terreno adecuado para el crecimiento de plantas, tubos para la malla.